产品概述
本试剂盒是piggyBac转座子系统试剂盒，可提供细胞和PB系统质粒。PB系统质粒包含有：一个辅助质粒：编码转座酶；一个转座子质粒：两端含转座子特异性反向重复序列（ITR），中间是被转座基因区域，可转座到宿主基因组中。实验时需同时将辅助质粒和转座子质粒共同转染靶细胞，辅助质粒编码的转座酶识别转座子质粒两端的ITR序列并切割，释放的被转座基因区域由转座酶整合到宿主基因组中含TTAA序列的位点，并在被转座区两端出现TTAA重复序列，当再次转染辅助质粒时转座酶可将基因组中的转座子移除。
piggyBac转座子系统作为非病毒载体，与传统的病毒载体相比，PiggyBac具有以下优势：安全性高、操作方便（可直接用质粒转化细胞）；载体容量大，可实现多基因的共表达；可顺利获得调节转座子质粒和辅助质粒的比例，提高外源基因的整合效率，并且可顺利获得反向PCR精确确定目的基因插入的位置；再次转座后实现转座子精确切离；宿主范围广，转座效率高，较少依赖宿主因子。
试剂盒组分
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组分 |
规格 |
储存温度 |
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PB系统质粒 |
辅助质粒（500 ng/μL） |
pCAG-PBase |
4 μg |
-20 ℃ |
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转座子质粒（500 ng/μL） |
PB-CMV-MCS-EFIα-CopGFP-T2A-Puro |
10 μg |
-20 ℃ |
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质粒图谱示图
备注：启动子可选择CMV、CAG、EF1α。
操作流程图
PB基因转座细胞株构建流程示意图
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